1-usul: Ekstraksiya usuli (hozirda mening mamlakatimda qo'llaniladigan usul; u pastroq tozalikni beradi, lekin ishlab chiqarish xarajatlarini kamaytiradi.)
Oksitotsin eritmasini olish: 100 g quritilgan orqa gipofiz kukuni va 30 g kvarts kukunini oling, ularni shar tegirmoniga soling va distillangan suv qo'shing. Xuddi shu protsedura yordamida ekstraktsiyani to'rt marta bajaring. Har bir bosqich uchun qo'shilgan distillangan suv hajmi quyidagicha: dastlabki ikkita ekstraktsiya uchun 1,4 L va keyingi ikkitasi uchun 1,3 L. Har bir ekstraksiya 45 daqiqa davomida amalga oshiriladi, so'ngra suyuqlikni yig'ish uchun santrifüj qilinadi; keyin qolgan qoldiq keyingi ekstraktsiyaga duchor bo'ladi. Olingan to'rtta ekstrakt oksitotsin eritmasini olish uchun birlashtiriladi. Xulosa: Quritilgan orqa gipofiz kukuni [Suv, shar tegirmoni] → Oksitotsin ekstrakti → Xromatografik ajratish.
1500 g oldindan ishlangan{2}}sintetik zeolitni oling, 20 l 0,25% sirka kislotasi eritmasini qo'shing va-aralashgandan so'ng-aralashmani ion almashish ustuniga-quying. Sirka kislotasi eritmasi darajasi zeolit to'shagining yuzasidan 2-3 sm balandlikda bir nuqtaga tushgandan so'ng, darhol oksitotsin ekstrakti kiriting. Tegishli oqim tezligini saqlang va hosil bo'lgan oq, loyqa elyuatni to'plang (bu fraktsiya asosan oksitotsinni o'z ichiga oladi; chunki oksitotsinning izoelektrik nuqtasi [pI] 7,7-, vazopressin esa 10,9 pIga ega vazopressin osongina musbat ionlar hosil qiladi va shuning uchun ustunga adsorblanadi). Ekstraktning suyuqlik darajasi zeolit qatlami yuzasiga tushishi bilan darhol distillangan suv qo'shing va oqim to'xtaguncha loyqa elyuatni yig'ishni davom eting. Muzlik sirka kislotasi yordamida yig'ilgan loyqa elyuatning pH qiymatini 3,5 ga sozlang. Eritmani suv hammomida 95 darajaga qadar tez qizdiring, bu haroratni 3 daqiqa ushlab turing, so'ngra eritmani tez sovutib, bir kechada muzlatgichga qo'ying. Xulosa: Oksitotsin ekstrakti [HAc, sintetik zeolit ustuni] → loyqali eluat [HAc, isitish] → ajratilgan eritma → adsorbsiya va elutsiya. Ertasi kuni sovutilgan eritmani filtrlang. Filtrga aralashtirganda 10% li bentonit shlamini qo'shing (100 ml filtratga 3 ml bulamaç qo'shing). Adsorbsiyani osonlashtirish uchun 1 soat davomida aralashtirishda davom eting, keyin aralashmani sentrifuga qiling. Sulfosalitsil kislota reaktiv eritmasi yordamida supernatant suyuqlikni sinab ko'ring; hech qanday cho'kmaning yo'qligi adsorbsiya jarayoni tugallanganligini ko'rsatadi. Agar adsorbsiya to'liq bo'lmasa, bentonit bilan ishlov berish jarayonini takrorlang; keyinchalik, ikkala adsorbsiya bosqichidan olingan bentonit cho'kmalarini birlashtiring. Bentonit 1% sirka kislotasi (mos ravishda 1,6 L, 1,4 L, 1,2 L va 0,8 L hajmlari bilan) yordamida to'rt marta elutsiya qilinadi. Har bir eluat uchun eritma 80 gradusgacha qizdirilgandan so'ng *tert*-butiltriklorid qo'shiladi; Keyin harorat 95 darajaga ko'tariladi, 25 darajaga tez sovutiladi va filtrlanadi yoki santrifüj qilinadi. Olingan to'rtta filtrat quvvat va vazopressin chegarasini aniqlash uchun birlashtiriladi. Jarayon oqimi quyidagicha: Sovutgichli eritma [Filtrlash] → Filtrlash [Bentonit atala] → Adsorbat [1% HAc] → Eluat. Oksitotsin in'ektsiyasini tayyorlash:
Sifat standartlariga javob beradigan tahlil qilingan oksitotsin eritmasi 5 U/ml yoki 10 U/ml konsentratsiyaga suyultiriladi. Keyin u No. 4 yoki No. 5 sinterlangan shisha voronka orqali filtrlanadi, ampulalarga solinadi va yakuniy mahsulot olish uchun 30 daqiqa davomida 100 daraja haroratda oqayotgan bug‘ yordamida sterillanadi. Jarayon oqimi quyidagicha: Oksitotsin eritmasi (tahlil tasdiqlangan) [Filtrlash, to'ldirish, sterilizatsiya] → Oksitotsin in'ektsiyasi.
Sintetik zeolitni qayta tiklash: sintetik zeolit ikki marta distillangan suv bilan yuviladi. Keyin 1,5 l suv (500 g zeolit asosida hisoblangan) va 150 g natriy xlorid qo'shiladi va aralashmani yuvish va vazopressinni olib tashlash uchun 2 soat davomida aralashtiriladi. Keyin seolit xlorid ionlari qolmaguncha distillangan suv bilan yuviladi. Tegishli miqdorda suv qo'shiladi va pH natriy gidroksid yordamida 9 ga o'rnatiladi; aralashma 30 daqiqa davomida aralashtiriladi, shundan so'ng supernatant suziladi. Seolit distillangan suv bilan yuviladi, pH sulfat kislota yordamida 5,5-6 ga o'rnatiladi va deyarli neytral bo'lguncha yana suv bilan yuviladi. Keyin ortiqcha suvni olib tashlash uchun filtrlanadi va kelajakda foydalanish uchun 105 daraja quritiladi. Ishlatishdan oldin kerakli miqdorda suv qo'shiladi va pH namlash uchun aralashtirib, muzli sirka kislotasi yordamida sozlanadi. 10% li bentonit shlamini tayyorlash: Bentonit va suv 1:10 massaga{17}}hajm nisbatida aralashtiriladi. Aralash taxminan 1 soat davomida maydalanadi, bu vaqt davomida barqaror pH 3,5 ni saqlash uchun sirka kislotasi qo'shiladi. Keyin olingan atala kelajakda foydalanish uchun muzlatgichda saqlanadi. 2-usul: Kimyoviy sintez. Birinchidan, benziloksikarbonil-leysin *p*-nitrofenil esteridan boshlab, geptapeptid amid (3-9-segmentlar) sintezlanadi; keyin benziloksikarbonil-S-benzilsistein-tirozin azid (1-2-segmentlar) sintezlanadi; uchinchi bosqichda esa oksitotsin sintezlanadi.