GF-1 LR3, Long R3 insulin-o‘sish omili-1 kabi qisqartma, odatda LR3 yoki Long R3 nomi bilan tanilgan, endogen IGF-1 ning o‘zgartirilgan versiyasidir. Inson IGF-1 dastlab 70 peptidga (7,6 kDa) ega. U N-terminusda qattiq biriktirilgan 13 ta aminokislotalarga (MFPAMPLSSLFVN…) ega va uchinchi glutamat (Glu) Arg bilan almashtirildi, natijada 83-peptid, 9117,5 Da, CAS 946870-92-4 hosil bo'ldi.
Mahalliy IGF-1 darhol oltita IGFBP (bog'lovchi oqsillar) bilan bog'lanadi, ular bo'sh holatda 1% dan kam va plazmaning yarim umri atigi 15 daqiqani tashkil qiladi, bu esa uzoq{8}}ta'sir qiluvchi signalizatsiya tahlillarini o'tkazishni juda qiyinlashtiradi. LR3 ga qilingan ushbu modifikatsiya uning IGFBP ga yaqinligini taxminan 1000 martaga keskin kamaytirdi, erkin peptidlar ulushini maksimal darajada oshirdi va yarim yemirilish davrini 20-30 soatgacha uzaytirdi, shu bilan birga retseptorlari (IGF-1R) uchun asl nusxadagi kabi bir xil yaqinlikni saqlab, uni "IGF-1"ga aylantirdi.
IGF-1R (tirozin kinaz) ni bog‘lash → ikkita yo‘lni ishga tushiradi: PI3K/Akt/mTOR va MAPK/ERK. Bu ribosomal S6K va 4E-BP1 fosforillanishiga, to'liq protein translatsiyasiga va FoxO ning bostirilishiga olib keladi, natijada oqsil parchalanishi va sinteziga olib keladi. Bu miyoblastlar / C2C12, xondrositlar, CHO hujayralari va MSClarning ko'payishi va farqlanishiga yordam beradi.
Asosiy tadqiqot qiymati ("bitta in'ektsiya bilan mushaklarning o'sishi" deb noto'g'ri tushunmang):
Uzoq{0}}ta'sir etuvchi IGF-1R probi: zardob/IGFBP o'z ichiga olgan tizimlarda retseptorlarning barqaror joylashishi, signal davomiyligi, retseptorlarning regulyatsiyasi va mTOR kinetikasi jihatidan dastlabki IGF-1dan sezilarli darajada toza.
Sarum-erkin/past-zardob madaniyatining oltin hamkori: Repligenning LONG R3 IGF-I sanoat darajasidagi-qo‘shimchasi bo‘lib, apoptozni inhibe qiladi va CHO/MSC zichligini oshiradi, insulinga qaraganda yuqori barqarorlik va arzonroq narxni taklif qiladi.
Approximately 3 times the in vitro potency of the original IGF-1, requiring less dosage; however, high concentrations (>200 ng/ml) aslida retseptorlari endositozini pasaytiradi va trombotsitlar proliferatsiyasini rag'batlantirishi mumkin; yuqori konsentratsiyalar har doim ham yaxshi emas.
Ogohlantirish: Bu klinik dori emas; u FDA tomonidan tasdiqlanmagan va WADA uni peptidlar uchun kulrang maydonda tasniflaydi. Fitnes hamjamiyatida qo'llaniladigan "50-100 ug teri osti ablasyonu" sxemasi tadqiqot protokoli emas, balki jamoat dozasidir. Bundan tashqari, IGF-1R o'zi o'simta ko'payishi bilan bog'liq va uzoq muddatli noto'g'ri foydalanish muhim nazariy xavflarni keltirib chiqaradi.
Saqlash (reagent liyofillangan kukun, 9 kDa protein kichik peptid emas)
Qayta tiklanmagan liyofillangan kukun: -20 daraja haroratda, yopiq, yorug'likdan himoyalangan joyda va qurituvchi bilan 1-3 yil davomida saqlang. -80 darajada arxivlash eng barqaror hisoblanadi. 4 daraja haroratda uzoq vaqt saqlamang va xona haroratida saqlamang.
Qayta tiklangan eritma: Ko'pgina brendlar steril 0,1% sirka kislotasi (pH 3,5-4,5) bilan dastlabki qayta tiklashni tavsiya qiladi (neytral suv bilan to'g'ridan-to'g'ri erish agregatsiyaga olib keladi!), konsentratsiya 0,1-2 mg / ml; Yaroqlilik muddati 2-8 daraja haroratda faqat 2-7 kun. Uzoq muddatli saqlash uchun uni yuklash muhiti bilan taqsimlash kerak (0,1% BSA / 5% HSA / 5% trehaloza / 10% FBS). -80 daraja haroratda bitta xizmat 3-12 oy davom etishi mumkin.
Ishchi eritma: PBS yoki 0,1% BSA ni o'z ichiga olgan to'liq madaniy muhit bilan suyultiriladi. 4 daraja haroratda hujayra madaniyati xonasida qisqacha saqlang. Qayta-qayta muzlatish{4}}erish davrlaridan saqlaning.
Ehtiyot choralari:
Ochilishdan oldin 30 soniya davomida 8000–12000 g markazga qo'ying. 9 kDa oqsil liyofilizatsiyasi uchun shishani devor va qopqoqqa yopishtiring. Santrifüjsiz to'g'ridan-to'g'ri suv qo'shmang; shishaning tagidagi "ko'rinmas kukun" puldir.
Dastlabki eritish uchun 0,1% sirka kislotasidan foydalanib, vorteksga yo'l qo'ymaslik uchun hujayra devori bo'ylab asta-sekin chayqash kerak. Har bir vorteks konformatsiyani yarmiga buzadi. Naychani tiniq va rangsiz bo'lguncha aylantirish/teskari aylantirish orqali asta-sekin aralashtiramiz. Tumanli yoki flokulyant bo'lgan har qanday eritmani tashlang, chunki yig'ilgan LR3 retseptorlari nol bog'lanish yaqinligiga ega bo'ladi.
Past konsentratsiyalar naycha devoriga haddan tashqari adsorbsiyani keltirib chiqaradi: ish konsentratsiyasi 1–100 ng/ml bo'lsa, tashuvchi sifatida 0,1% BSA yoki past{3}}adsorbsion naychalardan foydalanmang. Quduqlarga qo'shilgan haqiqiy miqdor nominal konsentratsiyaning atigi 30-50% ni tashkil qiladi, bu esa hujayra ichidagi hajmli emissiyalarni (CV) qo'zg'atadi.
pH sezgirligi: sirka kislotasi eritmasini hujayralarga to'g'ridan-to'g'ri qo'shmang (pH zarbasi hujayralarni o'ldiradi). Madaniyat tizimiga qo'shishdan oldin-kamida 1:100 nisbatda BSA o'z ichiga olgan neytral buferga suyultiring.
CoA monitoringi: HPLC 98% dan katta yoki teng, MS tasdiqlash 9117,5 Da, endotoksin<0.01–1 EU/μg (stricter requirements for cell therapy-grade MSCs); oxidized Met or its truncated form are latent antagonists. RUO label: The label reads "Research Use Only, not for human use," indicating it's not a legally approved drug for human injection; it's for internal use within the IACUC system. Don't mistake peptide suppliers for pharmacies.
Proliferatsiya tajribalari uchun uchta nazorat zarur: bo'sh gomologik sarum nazorati + original IGF-1 ekvimolyar nazorat + IGF-1R inhibitori (pikropodofillin/OSI-906). Aks holda, LR3 faol moddami yoki zardobdagi boshqa omillar yordam beradimi, noma'lum.
Issiq teglar: Maxsus bodibilding peptid preparatlari IGF1-LR3 0.1mg/flakon 1mg/flakon, Xitoy Maxsus bodibilding peptid preparatlari IGF1-LR3 0.1mg/flakon 1mg/flakon ishlab chiqaruvchilar, yetkazib beruvchilar, zavod
